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抗体假狂犬病猪蛋白gE抗体的快速检测方法
时间:2019-09-08 10:33 来源:365BET 作者:admin 点击:
抗体假狂犬病猪蛋白gE抗体的快速检测方法
张瑶
[摘要]伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的多种动物的共病。猪是伪狂犬病病毒的天然宿主。
2011年底,接种了减毒疫苗的州猪用Bartha-K61菌株删除了gE基因,该农场遭受了严重的经济损失。
病毒分离等实验表明,发育的根本原因是菌株突变。
感染PRV变体和疫苗的猪的鉴别诊断是控制伪狂犬病的国际策略之一。
为了预防和有效控制猪伪狂犬病,迫切需要建立一种检测抗PRV变异体GRV蛋白抗体的方法。
在该实验中,来自河南的新PRV菌株gE蛋白在原核系统中表达,并且建立了许多方法来检测针对gE蛋白的抗体。
建立间接ELISA方法以覆盖零抗原浓度。
32μg/ ml,稀释血清1:400,阻断牛血清白蛋白(BSA)至1%,稀释猪抗palina IgG 5000倍,信噪比5倍这是。积极的标准
与阻断ELISA试剂盒相比,该方法的一致率为91。
36%,敏感度为76。
92%,特异性为94。
12%
为了建立基于间接ELISA实验的更快检测方法,我们分别使用gE蛋白和猪IgG作为检测线和质控系,并制备标记为抗IgG的金胶体颗粒。用于制备由金胶体免疫层析组装的免疫胶体金的山羊猪。
测试条质量控制线(线C)用2mg / ml猪IgG包被,测试线(线T)用2mg / ml gE蛋白包被。
绵羊抗猪IgG pH 9的胶体金标准
0?9
2,浓度0。
07毫克/毫升。
虽然灵敏度实验发现,当血清稀释640倍时,测试和质量控制系列最为明显,但特异性测试显示条带的特异性较低。
为了更快速和准确地检测gE蛋白抗体,我们建立了基于磁珠的测定。
优化反应条件后,该方法的检出限达到血清阳性稀释度的51,200倍,线性范围为血清稀释度的50-25,600倍,与ELISA法相比灵敏度显着提高。
此外,该方法可在30分钟内完成gE蛋白抗体的检测。
总之,本实验建立了三种检测抗PRV gE蛋白抗体的方法:间接ELISA法,免疫层析试纸条法和基于磁珠的快速检测法。
基于磁珠的快速检测具有灵敏度高且易于操作的优点,并且有望在用于快速检测PRV gE蛋白抗体的新商业试剂盒中开发。
[补助单位]:华中农业大学[学年]:硕士学位[评分年份]:2018年[分类号]:S852。
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